Практикум по микробиологии

Т34 Теппер Е. 3. и др. Практикум по микробиологии/Е. 3. Теппер, В. К. Шильникова, Г. И. Переверзева. - 4-е изд., перераб. и доп. - М.: Колос, 1993. - 175 с.: ил. - (Учебники и учеб. пособия для высш. учеб. заведений). ISBN 5-10-002834-3, ББК 40.5, УДК 579.64(075.8) (Теппер Екатерина Зельмановна, Шильникова Викторина Кузьминична, Переверзева Генриетта Ивановна) Показаны приемы исследования микроорганизмов. Приведены методы изготовления и стерилизации питательных сред, количественного и качественного учета бактерий и грибов на различных субстратах. Описаны работы, посвященные микробиологическому анализу почвы, бактериальных препаратов и кормов. Для студентов вузов по агрономическим специальностям.
ОГЛАВЛЕНИЕ
Раздел первый. ОБЩАЯ МИКРОБИОЛОГИЯ
Глава 1. Микроскоп и техника микроскопирования
1.1. Устройство микроскопа
1.1.1. Механическая часть микроскопа	3
1.1.2. Оптическая часть микроскопа	4
1.2. Основные технические характеристики микроскопа
1.2.1. Увеличительная способность микроскопа	9
1.2.2. Разрешающая способность микроскопа	9
1.3. Работа с микроскопом
1.3.1. Общие правила работы с микроскопом	10
1.3.2. Работа с иммерсионной системой микроскопа	10
1.3.3. Установка освещения	11
1.3.4. Измерение объектов	11
Глава 2. Культивирование, посев, хранение и приготовление препаратов микроорганизмов
2.1. Общие представления
2.1.1. Основные термины	12
2.1.2. Техника посева	14
2.1.3. Хранение микроорганизмов	15
2.2. Методы приготовления препаратов микроорганизмов
2.2.1. Техника взятия культуры для приготовления препарата	15
2.2.2. Исследование живых клеток микроорганизмов методами 'раздавленной' и 'висячей' капли	15
2.2.3. Фиксированные препараты микроорганизмов	16
Глава 3. Исследование морфологии микроорганизмов
3.1. Форма клеток
3.1.1. Бактерии	18
3.1.2. Актиномицеты	21
3.1.3. Нокардиа	23
3.1.4. Микобактерии	23
3.1.5. Грибы	23
3.2. Строение (цитохимические методы исследования)	28
3.2.1. Окраска клеток микроорганизмов по Граму	29
3.2.2. Выявление кислотоустойчивости у бактерий методом Циля-Нильсена	30
3.2.3. Окраска спор у бактерий	31
3.2.4. Окраска капсул	32
3.2.5. Окраска жгутиков	33
3.2.6. Окраска ядерного вещества бактерий	34
3.2.7. Окраска включений клеток микроорганизмов	35
Глава 4. Питание микроорганизмов
4.1. Значение отдельных питательных элементов	37
4.2. Приготовление питательных сред
4.2.1. Общие сведения	40
4.2.2. Мясо-пептонный бульон (МПБ)	41
4.2.3. Мясо-пептонный агар (МПА)	42
4.2.4. Мясо-пептонная желатина (МПЖ)	42
4.2.5. Картофельный агар	43
4.2.6. Пивное сусло	43
4.2.7. Сусло-агар	43
4.2.8. Обезжиренное молоко	43
4.2.9. Дрожжевые среды	44
4.2.10. Бобовый отвар	44
4.3. Методы стерилизации
4.3.1. Прокаливание, или фламбирование	44
4.3.2. Стерилизация сухим жаром	44
4.3.3. Стерилизация текучим паром	46
4.3.4. Стерилизация насыщенным паром под давлением	46
4.3.5. Пастеризация	47
4.3.6. Стерилизация фильтрованием через мелкопористые фильтры	47
Глава 5. Учет численности и выделение чистой культуры микроорганизмов
5.1. Методы учета численности
5.1.1. Учет численности бактерий в почве методом питательных пластин (метод Коха)	48
5.1.2. Учет численности микроорганизмов в воде и других жидкостях	50
5.1.3. Учет численности бактерий в воздухе	51
5.2. Выделение чистой культуры бактерий	52
Глава 6. Идентификация микроорганизмов
6.1. Морфологические и культуральные признаки микроорганизмов
6.1.1. Морфологические признаки	53
6.1.2. Культуральные признаки	54
6.1.3. Определение качественного состава микроорганизмов по культуральным и морфологическим признакам	56
6.2. Физиолого-биохимические признаки микроорганизмов
6.2.1. Общие сведения	61
6.2.2. Отношение к источникам углерода и азота	62
6.2.3. Изучение продуктов жизнедеятельности	62
6.2.4. Отношение к кислотам и щелочам	63
6.2.5. Отношение к кислороду	63
6.2.6. Устойчивость к факторам внешней среды	63
6.2.7. Отношение к антибиотикам и лизоциму	63
Глава 7. Превращение микроорганизмами безазотистых органических веществ
7.1. Брожение
7.1.1. Общие сведения	64
7.1.2. Спиртовое брожение	65
7.1.3. Молочнокислое брожение	68
7.1.4. Маслянокислое брожение	73
7.1.5. Брожение пектиновых веществ	75
7.1.6. Брожение целлюлозы	76
7.2. Окисление
7.2.1. Окисление целлюлозы	78
7.2.2. Окисление жира	81
Глава 8. Превращение микроорганизмами органических и минеральных соединений азота
8.1. Аммонификация
8.1.1. Аммонификация белковых веществ	83
8.1.2. Аммонификация мочевины	85
8.2. Нитрификация и денитрификация
8.2.1. Выявление бактерий различных фаз нитрификации	86
8.2.2. Жидкие культуры нитрифицирующих бактерий	89
8.2.3. Денитрификация (нитратное дыхание)	90
8.3. Азотфиксация
8.3.1. Знакомство с клубеньковыми бактериями	91
8.3.2. Свободноживущие азотфиксирующие бактерии	93
8.3.3. Знакомство с новыми формами азотфиксирующих бактерий	96
Раздел.второй. СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННАЯ МИКРОБИОЛОГИЯ
Глава 9. Общий микробиологический анализ почвы
9.1. Подготовка микробиологического материала для анализа
9.1.1. Взятие средней почвенной пробы и подготовка образца	99
9.1.2. Приготовление почвенной суспензии и посев	99
9.2. Состав и приготовление питательных сред для разных групп микроорганизмов
9.2.1. Группы микроорганизмов, выявляемые на плотных средах	101
9.2.2. Группы микроорганизмов, выявляемых на жидких средах (метод предельных разведений)	102
9.2.3. Группы микроорганизмов, выявляемых методом обрастания комочков почвы	103
9.3. Определение численности различных групп микроорганизмов
9.3.1. Учет на плотных средах	104
9.3.2. Учет на жидких средах	107
9.3.3. Учет методом обрастания комочков почвы	111
9.3.4. Определение общей численности микроорганизмов в почве прямым подсчетом под микроскопом	112
Глава 10. Изучение микробных ценозов почвы и микроорганизмов ризосферы
10.1. Общий состав и соотношение почвенных микроорганизмов
10.1.1. Метод обрастания стекол по Холодному	115
10.2. Микроорганизмы, разлагающие гумусовые вещества
10.2.1. Метод Виноградского	116
10.2.2. Метод Виноградского в модификации Теппер	116
10.3. Микробные ценозы, участвующие в разложении различных органических и неорганических остатков в почве
10.3.1. Разложение микроорганизмами свежих органических остатков с образованием гумуса	117
10.3.2. Изучение микробных ценозов, участвующих в разложении гербицидов - производных сим-триазинов в почве	119
10.3.3. Микробные пейзажи при нитрификации, разложении гумусовых кислот и деструкции симазина и атразина (метод Теппер)	119
10.4. Микроорганизмы, обитающие в прикорневой зоне и на корнях растений
10.4.1. Общие сведения	121
10.4.2. Учет бактерий в ризосфере методом Красильникова	121
10.4.3. Учет ризосферной и корневой микрофлоры методом последовательных отмываний корней (по Теппер)	122
Глава 11. Биологическая активность почвы
11.1. Общая биологическая активность почвы
11.1.1. Определение общей биологической активности почвы по методу Мишустина, Вострова, Петровой (по интенсивности разложения полотна)	123
11.1.2. Метод определения общей микробиологической активности почвы по выделению диоксида углерода	123
11.2. Аммонифицирующая активность почвы и микроорганизмов
11.2.1. Определение аммонифицирующей активности почвы	124
11.2.2. Определение аммонифицирующей активности микроорганизмов	125
11.3. Нитрифицирующая и денитрифицирующая активность почвы
11.3.1. Определение нитрифицирующей активности почвы	126
11.3.2. Определение денитрифицирующей активности почвы	126
11.4. Азотфиксирующая активность микроорганизмов
11.4.1. Определение азотфиксирующей активности ацетиленовым методом	127
11.4.2. Определение актуальной (полевой) и потенциальной активности азотфиксации в почве методом Умарова	128
11.4.3. Определение нитрогеназной активности симбиотических азот-фиксирующих бактерий	130
11.4.4. Работа на газовом хроматографе	131
11.5. Выделение и изучение чистых культур клубеньковых бактерий
11.5.1. Выделение чистой культуры клубеньковых бактерий	133
11.5.2. Определение специфичности клубеньковых бактерий. Отбор активных (или эффективных) культур клубеньковых бактерий	135
11.5.3. Определение общего и активного симбиотического потенциалов (ОСП, АСП) и удельной активности симбиоза (УАС) по методу Посыпанова	138
11.5.4. Определение вирулентности и конкурентоспособности клубеньковых бактерий	139
Глава 12. Анализ бактериальных препаратов
12.1. Жизнеспособность клеток клубеньковых бактерий
12.1.1. Экспресс-метод определения жизнеспособности клеток клубеньковых бактерий в сухом нитрагине по Шильниковой, Сигуте	141
12.1.2. Экспресс-метод определения числа жизнеспособных клеток клубеньковых бактерий в ризоторфине на мембранных фильтрах по Шильниковой, Сигуте	143
12.2. Определение числа клеток азотобактера в азотобактерине	145
Глава 13. Микробиология кормов
13.1. Эпифитные микроорганизмы зерна
13.1.1. Общие сведения	145
13.1.2. Количественный учет микроорганизмов на зерне	146
13.1.3. Определение качественного состава микрофлоры зерна	147
13.2. Микробиологический анализ силоса
13.2.1. Общие сведения	147
13.2.2. Качественный состав микрофлоры силоса	149
13.2.3. Количественный учет микроорганизмов в силосе	149
13.2.4. Определение кислотности силоса	151
Глава 14. Микробиология продуктов животноводства
14.1. Бактериологический анализ молока
14.1.1. Общие сведения	153
14.1.2. Проба на редуктазу	154
14.1.3. Определение общего количества бактерий в молоке	155
14.1.4. Определение титра кишечной палочки (коли-титр)	156
14.1.5. Определение в молоке количества спор лактатсбраживающих анаэробных бактерий	156
14.2. Методы выделения чистых культур молочнокислых бактерий
14.2.1. Выделение чистой культуры ацидофильной палочки	159
14.2.2. Выделение чистой культуры молочнокислого стрептококка	160
14.3. Микробиологический анализ других продуктов
14.3.1. Микробиологический анализ сыра	161
14.3.2. Микробиологический анализ сливочного масла	162
14.3.3. Микробиологический анализ мяса	163
14.4. Определение чувствительности микроорганизмов к антибиотикам	165
14.5. Микробиологический контроль воды
14.5.1. Общие сведения	166
14.5.2. Определение микробного числа	167
14.5.3. Определение коли-титра и коли-индекса	167
Литература	170